2009-5-26 來(lái)源:貝克曼庫(kù)爾特公司
關(guān)鍵詞：貝克曼庫(kù)爾特公司 病毒核酸提取
世界衛(wèi)生組織已將甲型H1N1流感警告級(jí)別提到5級(jí)，強(qiáng)烈顯示即將發(fā)生的大流行。據(jù)世衛(wèi)組織公布，截止于2009年5月13日11點(diǎn)，全球確認(rèn)甲型H1N1流感5,969例并蔓延28個(gè)國(guó)家，給各國(guó)在緊急預(yù)警和疫情控制方面提出了嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)。繼香港首例甲型H1N1確診后，5月11日，四川一例甲型H1N1流感疑似病例被確診，5月12日17時(shí)，山東報(bào)告1例甲型H1N1型流感疑似病例，當(dāng)日香港發(fā)現(xiàn)一名甲型H1N1流感疑似個(gè)案。由于病毒引起的感染癥狀多比較相似，采用常規(guī)方法很難確認(rèn)感染類(lèi)型，因此對(duì)于甲型H1N1流感的早期快速確診對(duì)于有效控制疫情至關(guān)重要。
美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司在病毒核酸提取，實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)化和病毒核酸檢測(cè)領(lǐng)域有著豐富的經(jīng)驗(yàn)和完整的解決方案。針對(duì)本次甲型H1N1流感疫情，公司已與國(guó)家CDC開(kāi)展合作，根據(jù)世界衛(wèi)生組織最新發(fā)布的H1N1流感病毒序列信息和雙方技術(shù)基礎(chǔ)聯(lián)合開(kāi)發(fā)甲型H1N1型流感病毒快速診斷方案，并同時(shí)開(kāi)發(fā)包括人流感，禽流感，豬流感，SARS等多種上呼吸道病毒檢測(cè)和變異分析標(biāo)準(zhǔn)方案，該方案具有快速、準(zhǔn)確、安全、低成本等特點(diǎn)，并可用于流感病毒快速篩查、病毒分型、突變檢測(cè)和流行病學(xué)研究。
• 病毒核酸安全提取
美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司的SPRI-TETM Viral NA提取試劑盒結(jié)合SPRI-TETM自動(dòng)核酸提取儀，為甲型H1N1流感病毒核酸的提取提供了快速安全的解決方案。SPRI-TETM采用固相載體可逆式磁珠對(duì)病毒RNA進(jìn)行高效抽提，從樣品的裂解到核酸的洗脫都無(wú)需人工干預(yù)，將操作者危險(xiǎn)性降到最低。SPRI-TETM系統(tǒng)可以一批次提取1-10個(gè)樣品，每批次提取時(shí)間約30分鐘。
• 特異性引物設(shè)計(jì)
根據(jù)WHO已公布甲型H1N1流感序列，美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司與國(guó)家CDC合作設(shè)計(jì)出高特異性PCR擴(kuò)增引物組。該引物組采用GeXP系統(tǒng)的 eXpress ProfilerTM模塊設(shè)計(jì)，包括5對(duì)特異性引物，分別為A型流感，H1N1型流感，季節(jié)性流感，甲型H1N1流感和質(zhì)控序列。與常規(guī)PCR引物不同，每對(duì)引物5’端均帶有通用引物，5組擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度范圍在100- 600堿基。
• 甲型H1N1病毒快速檢測(cè)
利用貝克曼公司專(zhuān)利的XP-PCR技術(shù)，對(duì)5對(duì)引物(5對(duì)流感病毒特異引物和一對(duì)內(nèi)質(zhì)控引物)進(jìn)行多重?cái)U(kuò)增( 整個(gè)流程由BiomekTM系列自動(dòng)化工作站完成)。多重PCR產(chǎn)物因長(zhǎng)度不同，可經(jīng)過(guò)毛細(xì)管電泳分離檢測(cè)。電泳原始數(shù)據(jù)、樣本信息和基因信息輸入GeXP軟件系統(tǒng)進(jìn)行分析， 即可得到樣本的病毒檢測(cè)報(bào)告。
• 病毒分型和變異檢測(cè)
在多重病毒監(jiān)測(cè)基礎(chǔ)上，利用標(biāo)準(zhǔn)甲型H1N1病毒引物擴(kuò)增病毒基因組序列，利用GeXP系統(tǒng)的序列分析功能分析病毒變異位點(diǎn)和可能的蛋白質(zhì)序列變異。
該方法可以將常見(jiàn)流感癥狀的可能病原體一次性?huà)呙瑁_定檢測(cè)樣本的感染類(lèi)型，具有樣本需求低，檢測(cè)速度塊，同時(shí)可以監(jiān)測(cè)病毒的變異狀況。
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