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使用馬爾文子公司Viscotek的SEC/GPC表征多肽的水動力變化
2009-8-3 來源:英國馬爾文儀器有限公司
關鍵詞:色譜 尺寸排阻色譜

根據巴黎巴斯德研究所科學家們的研究,當尺寸排阻色譜與三重檢測器(SEC-TDA)聯用后,能夠分辨蛋白質的寡聚、水合與粒形變化。這一工作是通過使用馬爾文的子公司--viscotek公司的高級凝膠色譜系統實現的。

通過整合Viscotek的三重檢測陣列系統(TDA302)與GPCmax色譜系統,研究團隊表征了百日咳致病菌的主要毒性物質——腺苷酸環化酶毒素碎片的結構與水動力學特征。研究團隊顯示鈣結合導致了蛋白質中重要的水動力學變化,為更深入地了解其生物功能打下基礎。研究成果已發表在著名雜志Biological Chemistry上(2009年1月刊,1781-1789頁)。

尺寸排阻色譜(SEC)的傳統校準方式是基于擁有已知標準蛋白質的水動力學體積。此類校準過程會由于目標蛋白質與SEC介質之間可能存在的相互作用產生誤差。因此,傳統校準無法提供分子質量或可靠的水動力學信息。

Viscotek TDA302使用一系列檢測器對流出樣進行。檢測器包括一個紫外-可見分光光度計,一個差分粘度儀(RI),一個小角(7°)光散射檢測器,一個側向光散射(90°)檢測器,以及一個壓差韋斯特橋粘度計。OmniSEC操作軟件能夠分析所有收集到的數據,并能以恰當的方式顯示。通常,紫外檢測器與差分粘度計可用于測定蛋白質濃度,以獲取絕對分子質量(MM)與特性粘度(IV)信息。選用用了Viscotek TD302系統,絕對分子量(MM)便可直接從光散射數據獲得,而特性粘度亦可直接從粘度計獲取,從而提供蛋白質的含水量與形狀信息。在本應用中,特性粘度是唯一受鈣結合影響的水動力學參數。這一系統提供的信息是了解蛋白質結合與折疊行為的基本信息,也是了解蛋白質是如何影響人體的關鍵。

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(子妍)
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