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Z的关注点更多地集中在微囊泡和外泌体,因ؓ它们正越来越多的被引用ؓ一个潜在的生物标记。虽然在q一新兴领域内的定义q不够正式,但这两类生物U米颗粒都可以通过其粒度范围和生物h加以区分?通常Q微泡的直径?00 nm? μmQ而外泌体的直径ؓ30 nm - 100 nm?微一般是通过l胞质膜h形成的,而外泌体则通过核内体的多体胞吐作用释攑և来?两者似乎均参与l胞信号传导Q可携带一pd信号传导蛋白以及信RNA和微microRNA分子 两者在血液中的@环水q_众多疄中都表现为增高,其中包括动脉_样化和冠状动脉疾病、血液病和炎症性疾病、糖病以及癌症?
目前Q外泌体的研I一直因~Z合适的表征试Ҏ而受到限制?马尔文的NanoSightpd产品采用独一无二的成熟技术而ɘq一需求得到满?U米颗粒跟踪分析QNTAQ技术允许实时地Ҏ液?0 nm - 1000 nm直径范围内特定的外泌体和微囊泡进行逐个的直接成像和观察?同时QNTA可提供高分L率的_度分布图表和浓度信息?该技术易用、快速、稳健、准且使用成本低,是对现有Ҏ的一个良好补充?在荧光模式下通过一pd不同Ȁ发L长的Ȁ光,可以Ҏ本中的已l被标记的颗_进行表征的定和鉴别?
和定l胞外囊泡的度
动态光散射QDLSQ和NTA都可以通过斯托克斯-爱因斯坦方程式测定运动速度或扩散系敎ͼDtQ与_度有关的纳c颗_的布朗q动?
使用NTAӞȀ光照悬液中的颗粒Qƈ用视频摄像机捕获所产生的散光?通过跟踪单个颗粒在二l^面上的位|变化来定颗粒的扩散情c?如果扩散pLQDtQ已知,可以确定颗_的体力学直径?
下图昄出颗_在溶液中进行布朗运动的情况?初步目视查表明,存在较大颗粒或聚集物Q图1AQ?然后QNTA软g快速生成逐个颗粒的高分L率粒度分布以及所观察到囊泡颗_的计数Q依据绝对计数浓度)Q图1BQ?
?* E释的无血板血样?AQNanoSight技术生成的典型囑փ 所生成的图像让用户能够立即识别其样品的某些Ҏ(包括度和多分散性水qI?BQ样品的_度分布与原始浓度计?*l果来源QC Gardiner1, RDragovic1, A Brooks1, D Tannetta1, D Redman2, P Harrison2, and I Sargent1Q?010Q?Nanoparticle TrackingAnalysis for the Measurement and Characterisation of Cellular Microvesicles and Nanovesicles, Proc NVTH BSTH 2010.
1Nuffield Department of Obstetrics and Gynaecology, University of Oxford
2Oxford Haemophilia & Thrombosis Centre, Churchill Hospital , Oxford, UK
替代技?/strong>
传统上,许多技术已被用来表征微c_U米囊Q同时有更多技术可用来分析微型颗粒?其中包括Q?
· 式l胞计数?
· 动态光散射QDLSQ?
· 电子昑־镜检查法QEMQ?
· 酶联免疫吔R分析QELISAQ?
上述技术中应用最q泛的是式l胞计数法。通常Q商用流式细胞A的实际粒度下限约?00 nmQ对于聚苯乙烯颗_)Q在该数gQ信h法与基线噪音区分开来。虽焉过使用荧光标记可以扩展该检限|但粒度较时Q准测定这c颗_大的能力严重受限?DLS也已用于此项应用Qƈ可ؓ单分散样品提供精的_度信息?NTA可以为需要高分L率粒度分布的DLS提供其他正交信息?电子昑־镜检查法是一U非常有用的微米和纳c_泡研I工P但其代h是资金运行成本高、样品制备昂c处理时间长以及样品制备后的样品完整性差?
定目的可选择?/strong>
虽然它通常以定样品中是否存在某一_度或粒度范围的颗粒Q但它还h鉴别和区分样品内特定的亚落颗粒的附加h倹{NanoSight技术能够借助cM抗体介导型荧光标记等ҎQ选择性地分析q类落?q种Ҏ使得用户可以只选择和分析l合有荧光标记型抗体的特异性纳c颗_,而非特异性背景颗_则通过使用适当的o光器而被排除。虽然可以用一pd荧光团,但用高效、高E_性的量子Ҏ记更具优势,可以取得最x果?
该技术如?A所C,通过装有蓝色激光二极管Q?05 nmQ的NanoSight 仪器Ȁ发的量子点的一个视频的荧光信受?q些量子点用来标记对合胞体滋d微QSTBMQ上的目标生物标记具有特异性的一U抗体(NDOG IIQ?
?B昄ZU粒度分布,其中包括Q?iQ(非荧光)光散器到的STBM样品中的所有颗_(蓝线Q; iiQ在荧光模式下测定的l合有荧光量子点标记 NDOG II抗体的颗_(U线Q;?iiiQ一U对照品Q绿U)Q由一个类似的量子Ҏ记抗体组成,但抗体对STBM上的目标生物标记没有亲和力(同样在荧光模式下定Q?q说明,样品中的大多数颗_都成功使用STBM特异性量子点NDOG II抗体q行了特异性标讎ͼq且对照品也成功昄低的背景信号?
?* AQ?借助抗体与STBM颗粒相结合的量子Ҏ得出的荧光图?BQ?来自散射光(蓝色Q、正抗体(U色Q和非正(对照Q抗体(l色Q的_度分布 h意计数浓度纵轴?/span>
l论
NTA能够对低度的微囊和外泌体q行大小和浓度测定,q且在与荧光标记联合使用Ӟ可以选择性地定和分析复杂样品中特定cd的颗_?/span>