私密直播全婐app免费大渔直播,国产av成人无码免费视频,男女同房做爰全过程高潮,国产精品自产拍在线观看

  抗生素濫用導致的細菌耐藥性已成為當今社會面臨的嚴重威脅，因此亟需發展新型抗菌試劑。相較于抗生素，抗菌肽具有高殺菌活性、廣譜抗菌性、不易產生耐藥性等優點，是當前抗菌領域的研究前沿和熱點。盡管已有多種抗菌肽被報道，但其作用機制尚不完全明確，部分原因是由于SEM、TEM、AFM等常規觀測手段，僅能提供抗菌肽與細菌結合后的靜態信息，難以揭示抗菌肽與細菌結合的動態過程。

  相對于上述靜態成像技術，熒光成像具有成本低、易于操作、可實時原位觀測等優點。由于抗菌肽在殺滅細菌時，通常需要高濃度聚集于細菌的表面或內部，而傳統熒光染料存在聚集猝滅發光（ACQ）的缺陷，難以用于抗菌肽的作用機制研究。此外，傳統熒光染料光穩定性差，難以長期實時監測抗菌肽與細菌的結合過程。因此，發展能夠克服ACQ缺陷，且簡便易得、光穩定性好的熒光探針，實時原位監測抗菌肽與細菌的結合過程，對揭示抗菌肽的作用機制具有重要意義。

  聚集誘導發光（AIE）材料具有聚集態發光效率高、斯托克位移大、生物相容性好、抗光漂白能力強等優點。近日，香港科技大學唐本忠院士團隊與華南理工大學王迎軍院士團隊合作，通過在抗菌肽HHC36（KRWWKWWRR）上修飾AIE分子2-(2-羥基苯基)苯并噻唑（HBT），制備了AIE探針AMP-2HBT（圖1），不僅保持了HHC36多肽的抗菌活性，而且由于其在稀溶液中發光很弱，可通過熒光“點亮”的方式，實時觀測抗菌肽與細菌的結合過程，進一步通過STORM超分辨熒光成像、SEM和TEM成像，有效揭示了抗菌肽HHC36通過破壞細菌膜的結構從而殺滅細菌的機制。

圖1 AIE探針AMP-2HBT的分子結構及其與細菌結合后點亮熒光并殺滅細菌的過程示意圖。

  通過比較抗菌肽HHC36與探針AMP-2HBT的殺菌效率，發現在HHC36多肽上修飾HBT分子，并未影響其殺菌活性（圖2）。例如，在10，20，50，100 μM濃度時，HHC36多肽和AMP-2HBT探針對大腸桿菌的殺滅效率分別為84.25，94.64，99.68，99.84%和87.56，94.33，99.53，99.95%。進一步研究發現，AMP-2HBT探針可迅速抑制細菌的活性，當將20 μM探針加入至細菌溶液（107 CFU mL–1）中時，所有細菌在2 min內即停止運動。

圖2 (A) 不同濃度HHC36多肽及AMP-2HBT探針對大腸桿菌的殺菌效率；(B) 加入AMP-2HBT探針后，大腸桿菌的運動活性隨時間的變化。

  探針AMP-2HBT具有典型的AIE性質，當其在稀溶液中時，由于分子內運動，熒光很弱；當其與細菌結合后，分子內運動受限，發出強熒光（圖3A）。因此探針AMP-2HBT可用于細菌的免洗成像，實時監測抗菌肽與細菌的結合過程。進一步，基于熒光顯微鏡和流式細胞儀分析發現（圖3B-F），隨時間的延長，AMP-2HBT探針與細菌結合的數量逐漸增加，其熒光強度亦逐漸增加，在30，45，60 min時，探針結合至細菌后的平均熒光強度分別為15 min時的2.9，4.6，6倍。

圖3 探針AMP-2HBT實時原位監測與細菌的結合過程：(A)探針AMP-2HBT和大腸桿菌自身，及與大腸桿菌結合后的熒光光譜；(B)–(E)不同時間下細菌的熒光照片；(F)不同時間下流式分析結果。

進一步，通過結合隨機光學重建顯微鏡（STORM）、掃描電鏡（SEM）和透射電鏡（TEM）分析發現，熒光探針AMP-2HBT可有效結合至大腸桿菌的細菌膜上（圖4），通過破壞細菌膜的結構，導致細菌內容物流出，從而有效殺死細菌。

圖4 (A，B) AMP-2HBT結合至大腸桿菌后的STORM超分辨熒光照片；(C，D) 分別為AMP-2HBT與大腸桿菌結合前后的TEM照片；(E，F)分別為AMP-2HBT與大腸桿菌結合前后的SEM照片。

  該工作通過在抗菌肽上修飾AIE分子，在不影響抗菌肽自身活性的前提下，可通過熒光成像實時動態觀測抗菌肽與細菌的結合過程和作用方式，有效克服了傳統熒光染料的聚集猝滅發光缺陷，為抗菌肽的機制研究提供了一種有效的研究工具。

  這一研究成果近期發表在《ACS Applied Materials & Interfaces》上，文章的共同第一作者為華南理工大學陳軍建博士、高蒙副研究員和王琳副研究員，本文的通訊作者為唐本忠院士、王迎軍院士和任力教授。

  論文鏈接：https://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021%2Facsami.7b18221