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哈佛醫學院Y. Shrike Zhang教授課題組 Adv. Mater.: 脫細胞基質生物墨水的快速體積生物打印
2024-01-25  來源:高分子科技

  基于脫細胞基質(dECM)的水凝膠廣泛應用于增材生物制造技術。 dECM 的細胞外基質成分和生長因子在細胞粘附、生長和分化中發揮著至關重要的作用。然而,較差的機械性能和打印性仍然是dECM 材料的主要限制。為發揮dECM材料的優勢,哈佛醫學院Y. Shrike Zhang教授團隊將其與體積增材制造(Volumetric Additive ManufacturingVAM)緊密結合起來,開發了基于未修飾的天然的豬心dECM (h-dECM) 和豬半月板dECM (Ms-dECM) 的生物墨水體系。通過VAM旋轉投影動態變化的光圖案實現的三維物體的快速光聚合,從而將對生物打印水凝膠結構的機械強度要求與打印性分開,允許使用低濃度的 dECM 生物墨水實現復雜形狀結構的快速打印。作為示例應用,使用裝載大鼠心肌細胞 (rCMs h-dECM體積打印心臟組織,顯示出較好的細胞增殖、展開和擴散, 并進一步使用裝載人誘導多能干細胞衍生的心肌細胞 hiPSC-CMs h-dECM生物墨水,展示了肌節結構的生成和同步收縮。同時使用裝載人間充質干細胞 (hMSCs 的 Ms-dECM生物墨水進行體積打印的半月板結構呈現出較好的軟骨分化結果。這項研究為VAM進一步擴展了生物墨水庫,并擴大了dECM在組織工程和再生醫學中的應用。


1. h-dECM Ms-dECM 生物墨水材料的制備和打印機理


  研究人員從豬的左心室和豬的半月板中分別提取了h-dECMMs-dECM兩種材料 (1)。基于兩種dECM中富含的絡氨酸基團能與Ru/SPS 光引發劑在一定條件下發生光聚合反應的機理,研究人員用不同濃度dECM材料與Ru/SPS按照一定比例混合,測試并優化了其光聚合效率和打印性。同時研究人員發現h-dECM Ms-dECM都可以在1%的低濃度條件下實現VAM復雜結構的快速打印(圖2)。


2. h-dECM he Ms-dECM VAM打印性測試和打印結果展示


  為了展示dECM生物墨水的生物打印性和細胞兼容性,研究人員將NIH/3T3 成纖維細胞與兩種dECM分別混合并進行VAM體積打印, 并發現在一定的細胞密度內并不會顯著影響其打印性。同時,由于dECM提供的良好的微環境,細胞在共培養的14天里展現了很好的細胞增殖、展開和擴散。這個現象進一步在混有rCMsh-dECM生物墨水打印的心臟結構中得到了驗證。為了進一步展示dECM-VAM打印體系的優勢,研究人員用混有hiPSC-CMsh-dECM生物墨水進行打印,并在第五天觀察到嵌入的hiPSC-CMs細胞開始節律性的跳動,同時第十天的免疫染色也驗證了相關肌節結構的生成(圖3)。


3. dECM-VAM生物打印測試和h-dECM打印結構的部分功能化展示


  最后研究人員也將hMSCs Ms-dECM混合并通過VAM打印了半月板結構。在分化前的14天體外培養中,hMSCs展現了很好的細胞活性,并充分增值,展開和擴散。隨后在三周的軟骨分化周期內,細胞也持續表達相關的軟骨分化基因,證明了該材料體系能提供較好的微環境,讓hMSCs進行相關分化活動。并且在五周的體外培養結束后,半月板結構并未發生明顯變化,展現了其較好的穩定性。由于天然半月板的有限血管化導致自我再生能力差,這種 VAM 生物打印半月板為半月板移植等相關生物醫學應用提供了潛在的可能。


4 Ms-dECM-VAM打印的半月板部分功能化展示


  總結:研究人員成功開發了基于VAM的天然的未經修飾的 dECM(生物)墨水,并證明了通過 VAM快速制造基于水凝膠的組織結構的潛力。通過優化配方,實現了低濃度h-dECM 和 Ms-dECM 復雜結構的打印, 并維持較好的打印保真度。更進一步地,基于 h-dECM 和 Ms-dECM 良好的細胞相容性,對體積生物打印的心臟和半月板結構進行了功能化實驗,展示了混合在 h-dECM 打印結構中或在其表面上 rCM 和 hiPSC-CM 的擴散和收縮行為,以及嵌入在 Ms-dECM 半月板結構中的hMSC 的軟骨分化。這項工作進一步擴展了VAM的生物墨水庫,同時拓寬了基于 dECM 的生物材料在生物醫學中的應用。


  相關工作以“Rapid Volumetric Bioprinting of Decellularized Extracellular Matrix Bioinks ”為題發表在Advanced Materials上。通訊作者為哈佛大學醫學院Y. Shrike Zhang教授。文章第一作者為哈佛醫學院連黎明(現為佐治亞理工大學/埃默里大學在讀博士)。論文共同第一作者為廣州醫科大學謝茂彬教授(香港理工大學博士,哈佛大學博士后(Y. Shrike Zhang教授課題組),廣東省杰青),哈佛大學醫學院/四川大學華西醫院聯合培養博士羅澤宇(現四川大學華西醫院副研究員)以及哈佛大學醫學院研究生張振銳。其他作者還包括哈佛醫學院Sushila Maharjan, Xuan Mu, Carlos Ezio Garciamendez-Mijares, Xiao Kuang, Guosheng Tang, Di Wang, Jie Guo, Federico Zertuche González, Victoria Manjarrez, Ling Cai, Xuan Mei,以及塔夫茨大學Jugal SahooGang LiDavid Kaplan教授。


  原文鏈接https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/adma.202304846


作者簡介


  謝茂彬 教授簡介:謝茂彬,博士,博士生導師,廣州醫科大學生物醫學工程學院教授,廣東省珠江人才計劃青年拔尖人才,廣東省杰青。2016年博士畢業于香港理工大學,2019-2021年美國哈佛大學醫學院博士后。長期從事3D生物打印和生物材料領域研究。發表學術論文33篇,其中以第一/通訊作者身份在Sci. Transl. Med.Nat. Commun.STAR Protoc.Adv. Mater.Adv. Funct. MaterBiomaterials等期刊發表學術論文30余篇。申請發明專利15件,其中PCT專利2件,已授權6件。目前是中國生物醫學工程學會會員、廣東省生物醫學工程學會生物醫用材料與臨床應用分會委員。同時擔任Adv. SciACS NanoSmallAppl. Mater. TodayNanoscale等國際著名學術期刊審稿人


  羅澤宇 副研究員簡介: 羅澤宇,四川大學華西臨床醫學院&哈佛大學聯合培養博士,分別師從周宗科教授和Y. Shrike Zhang教授。研究內容主要涉及3D生物打印、微流控技術、骨與軟組織工程等研究領域。截止目前,在Adv. Mater.PNASNat. Commun.MatterAdv. Function. Mater.SmallAdv. Health. Mater.等國際權威期刊上發表三大檢索收錄論文40余篇。論文被引用超過1000余次。2篇文章入選全球Top 1% ESI高被引論文。主持國家自然科學基金、博新計劃等高水平基金項目。

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(責任編輯:xu)
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