不同于傳統的逐層式打印方式,體積增材制造(Volumetric Additive Manufacturing,VAM)可以通過旋轉投影動態變化的光圖案從而實現三維物體的快速光聚合。然而,(生物)墨水的缺乏是限制VAM在生物醫學領域應用的瓶頸問題。
為解決上述瓶頸,哈佛醫學院Y. Shrike Zhang教授團隊開發了未改性的純絲蛋白(包括絲膠蛋白(silk sericin,SS)和絲素蛋白(silk fibroin,SF))(生物)墨水用于VAM(生物)打印。通過后處理的方法,VAM打印的SS結構展示了可逆的且可重復的收縮、膨脹或形狀記憶的特性;而VAM打印的SF結構則表現出可大范圍調控的機械性能特性,機械強度范圍可從幾百Pa調控至幾百MPa。這兩種純絲蛋白(生物)墨水都展現了良好的細胞相容性。這項研究工作擴展了VAM的(生物)墨水庫,進一步拓寬了其生物醫學應用范圍。
SS和SF(生物)墨水在低濃度下展現優異的VAM打印性能
研究人員從天然的蠶絲纖維中分別提取了SS和SS兩種成分,并利用SS和SF分子側鏈上的絡氨酸基團能與RU/SPS光引發劑復合物在一定條件下能發生光聚合反應機理,分別制備了SS和SF兩種(生物)墨水(圖1)。在接下來的打印性測試中,研究人員發現SS和SF都可以在低濃度下(2.5%)實現快速VAM打印,并展現出打印多種復雜結構的優良打印性能(圖2)。
圖2 SS和SF(生物)墨水VAM打印性測試
VAM打印SS結構的分辨率可達50 μm
隨后,在VAM打印分辨率測試中,研究人員利用VAM分別打印了多種具有細微結構特征的實心和空心結構(圖3)。發現VAM打印SS結構的最小分辨率可以達到45.9 μm,而VAM打印SF結構的最小分辨率是57 μm。VAM打印分辨會受到多種因素的影響,包括結構,光強,時間和(生物)墨水種類和濃度等,其中,入射光的穿透深度是一個非常重要的影響因素,而高濃度Ru引發劑會顯著降低入射光的穿透深度,從而降低VAM打印分辨率。
圖3 VAM打印SS和SF結構的分辨率測試
VAM打印的SS和SF結構表現出可調控的機械性能特性
通過后處理的方法,VAM打印的SS結構展示了可逆的且可重復的收縮、膨脹或形狀記憶的特性;而VAM打印的SF結構則表現出可大范圍調控的機械性能特性,機械強度(壓縮模量)范圍可從幾百Pa調控至幾百MPa,主要原因是通過后處理后,SF內部雙交聯網絡(絡氨酸雙鍵和beta折疊)的形成(圖4)。
圖4 VAM打印SS和SF結構的理化性能表征
SS和SF生物墨水都具展現了良好的細胞相容性
進一步,研究人員測試了SS和SF的VAM生物打印性和細胞兼容性。發現在一定的細胞密度內,活細胞的加入并不會顯著影響SS和SF的打印性。另外,VAM生物打印的SS和SF結構中,包裹的細胞在14天的體外培養中都保持了較高的存活率和細胞代謝活力(圖5)。在VAM生物打印的SS結構中,C2C12細胞展現出了比在SF結構中更明顯的展開行為。
圖5 VAM生物打印SS和SF細胞兼容性測試
VAM生物打印SF骨螺釘概念應用
最后,研究人員展示了VAM生物打印SF骨螺釘的概念應用前景(圖6)。首先利用VAM生物打印了SF骨螺釘,再將人骨髓間充質干細胞(MSCs)孵育在SF骨螺釘表面,在后續的體外培養中,MSCs能夠較好的粘附在SF骨螺釘表面并快速增殖,并且在14天的體外培養期間持續表達成骨相關基因,證明其能在SF骨螺釘表面維持高水平的細胞分化活力。另外,通過后處理方法使SF骨螺釘形成雙交聯網絡,大幅提高其機械強度,并在體外豬骨植入實驗中驗證了其可以作為可植入醫療器件的可行性。
圖6 VAM生物打印SF骨螺釘應用展示
總結:研究人員成功開發了天然、未改性的SS和SF(生物)墨水用于VAM(生物)3D打印,這兩種(生物)墨水在低濃度(2.5%)下都展現出能夠打印復雜結構的優異打印性能。其中,SS打印物的收縮和再膨脹特性是可逆的,表明其在形狀記憶材料、4D印刷、軟機器人和藥物輸送等領域的應用具有一定的潛力。通過進一步的后處理引發雙交聯網絡結構,VAM打印的SF無細胞結構的壓縮模量可從幾百Pa調控至約250 MPa。更重要的是,SS和SF均表現出了良好的細胞相容性。這項工作豐富了VAM的(生物)墨水庫。
原文地址:https://www.nature.com/articles/s41467-023-35807-7
謝茂彬 教授簡介
謝茂彬,博士,博士生導師,廣州醫科大學生物醫學工程學院教授,廣東省“珠江人才計劃”青年拔尖人才。2016年博士畢業于香港理工大學,2019-2021年美國哈佛大學醫學院博士后。長期從事3D生物打印和生物材料領域研究。發表學術論文33篇,其中以第一/通訊作者身份在Science Translational Medicine、Nature Communications、STAR Protocols、Advanced Functional Materials、Biomaterials等期刊發表學術論文30余篇。申請發明專利15件,其中PCT專利2件,已授權6件。目前是中國生物醫學工程學會會員、廣東省生物醫學工程學會生物醫用材料與臨床應用分會委員。同時擔任Advanced Science、ACS Nano、Small、Applied Materials Today、Nanoscale等國際著名學術期刊審稿人。
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