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西安交大郭保林/憨勇/趙鑫 AFM:具有組織密封和促凝血活性的網(wǎng)絡(luò)重塑、電活性和抗菌冷凍凝膠 - 用于止血和促進(jìn)皮膚傷口愈合
2025-04-08  來源:高分子科技
  長(zhǎng)久以來,促進(jìn)慢性感染傷口高質(zhì)量修復(fù)一直都是人們所關(guān)注的重要課題。皮膚作為人體最大的器官,對(duì)于維持機(jī)體健康狀態(tài)起著重要的作用。但其作為和外界直接接觸的屏障,極易受到損害。日前,西安交通大學(xué)郭保林教授、憨勇教授、趙鑫副教授團(tuán)隊(duì)利用季銨化殼聚糖接枝聚苯胺(QCSP)、氧化葡聚糖(OD)和苯甲醛封端的Pluronic F127(PF-CHO),通過雙重席夫堿交聯(lián),開發(fā)了一種具有優(yōu)異抗菌抗氧化性、可網(wǎng)絡(luò)重塑的冷凍凝膠敷料,用于止血和皮膚傷口修復(fù)。此外,通過利用冷凍凝膠的血液濃縮效應(yīng)將血液富集固定于冷凍凝膠表面,創(chuàng)新性地制備了血塊/冷凍凝膠復(fù)合敷料。該復(fù)合敷料有效解決了冷凍凝膠在傷口處屏蔽外界環(huán)境功能不完善的問題,同時(shí)能夠對(duì)血小板和血細(xì)胞進(jìn)行激活,以進(jìn)一步促進(jìn)傷口愈合,為止血敷料的發(fā)展開辟了新的方向。相關(guān)研究已發(fā)表《Advanced FunctionalMaterials》期刊上,論文題為Network-Remodeling, Electroactive and Antibacterial Cryogel with Tissue Sealing and Pro-Coagulant Activity for Hemostasis and Skin Wound Healing”,碩士生駱金龍、武正瑛擔(dān)任本文的共同第一作者,西安交通大學(xué)前沿科學(xué)技術(shù)研究院郭保林教授和西安交通大學(xué)材料學(xué)院趙鑫副教授擔(dān)任通訊作者。




  具有相互貫穿大孔結(jié)構(gòu)的冷凍凝膠可快速吸收傷口滲液,迅速止血,具有優(yōu)異的物質(zhì)運(yùn)輸能力。但也導(dǎo)致其無法有效屏蔽傷口與外部環(huán)境,且組織粘附性能不佳。設(shè)計(jì)止血、抗菌、促修復(fù)的多重功能冷凍凝膠敷料仍面臨諸多挑戰(zhàn)。


【主要?jiǎng)?chuàng)新】


  1. 本研究應(yīng)用雙重席夫堿交聯(lián),在相對(duì)穩(wěn)定的脂肪席夫堿的基礎(chǔ)上引入可以部分“斷裂-重塑”的動(dòng)態(tài)席夫堿交聯(lián),賦予冷凍凝膠充分溶脹后的網(wǎng)絡(luò)重塑特性,使冷凍凝膠轉(zhuǎn)變?yōu)楦咏z的狀態(tài),并粘附在周圍組織上,使其表現(xiàn)出優(yōu)異的止血性能和傷口密封性。


  2. 通過利用冷凍凝膠的血液濃縮和表面富集效應(yīng),制備了血塊/冷凍凝膠復(fù)合敷料,血塊的引入可以通過提供生物屏障、激活血小板釋放生長(zhǎng)因子、招募免疫細(xì)胞等促進(jìn)止血和皮膚傷口愈合。


  3. 本研究引入季銨化殼聚糖接枝聚苯胺(QCSP)用作冷凍凝膠的主要成分,為冷凍凝膠敷料提供了優(yōu)異的接觸抗菌活性、光熱抗菌特性以及抗氧化性能,導(dǎo)電聚苯胺所提供的電活性還有利于形成局部微電位,進(jìn)一步促進(jìn)組織修復(fù)。


. 網(wǎng)絡(luò)重塑、電活性和抗菌冷凍凝膠的合成



圖1 a) QP/OD/PF冷凝膠的制備方法和交聯(lián)機(jī)理。b) QP/OD/PF冷凍凝膠的協(xié)同抗菌機(jī)制。c) QP/OD/PF冷凍凝膠的網(wǎng)絡(luò)重構(gòu)特性。d) QP/OD/PF冷凍凝膠的止血性能。e) QP/OD/PF冷凍凝膠的血液濃度和表面富集效應(yīng)。f) 血塊/冷凍凝膠復(fù)合敷料(B-QP/OD/PF)治療皮膚傷口的愈合過程。


. 冷凍凝膠的機(jī)械、流變、組織粘附、溶脹性能、微觀形貌和降解性能



圖2 a) QP/OD/PF冷凍凝膠與組織粘附機(jī)理示意圖。b) 冷凍凝膠的軸向壓縮應(yīng)力-應(yīng)變曲線。c) 不同PF-CHO含量的濕態(tài)冷凍凝膠的流變性能。d) 濕態(tài)冷凍凝膠在潮濕環(huán)境中放置6小時(shí)后的流變性能。e) 冷凍凝膠體外降解的時(shí)間變化(n=3)。f) 冷凍凝膠的平衡溶脹時(shí)間和平衡溶脹比(n=3)。g)冷凍凝膠的平衡溶脹率。h) 通過SEM圖像顯示冷凍凝膠的微觀結(jié)構(gòu)。i) 不同PF-CHO含量的冷凍凝膠的孔徑分布。數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。使用t檢驗(yàn)確定統(tǒng)計(jì)差異(*p<0.05,***p<0.001)。


. 冷凍凝膠的電活性和抗氧化性能



圖3 a QCSQCSP和酸摻雜QCSP的紫外-可見光譜曲線。b QP/OD/PF50CV曲線。c 溶脹的Q/OD/PF50冷凍凝膠和QP/OD/PF冷凍凝膠的電導(dǎo)率(n=7)。d 冷凍凝膠的DPPH?清除率(對(duì)照組為Q/OD/PF50冷凍凝膠,濃度為2.5 mg mL?1, 實(shí)驗(yàn)組為QP/OD/PF50冷凍凝膠)(n=3)。


. 冷凍凝膠的體外生物相容性、近紅外光熱性能和體外/體內(nèi)抗菌性能



圖4 a) 通過直接接觸試驗(yàn)測(cè)定冷凍凝膠與L929細(xì)胞的細(xì)胞相容性(n=4)。b) 冷凍凝膠的溶血率和離心后上清液的照片(n=3)。通過體外直接接觸法測(cè)定凍凝膠對(duì)PA(c)和MRSA(d)的殺菌率(n=6)。ΔT—相同(e)和不同(f)功率水平下冷凍凝膠的近紅外光照射時(shí)間曲線。在近紅外輻射下,冷凍凝膠對(duì)細(xì)菌PA(g)和MRSA(h)的對(duì)數(shù)減少(n=4)。針對(duì)PA(i)和MRSA(j)的冷凍凝膠存活細(xì)菌菌落的圖像。k) 近紅外輻射下冷凍凝膠對(duì)MRSA的體內(nèi)抗菌殺滅率(n=6)。l) MRSA冷凍凝膠的體內(nèi)光熱抗菌性能圖像((i)空白組,(ii)QP/OD/PF0,(iii)QP/OD/PF50,(iv)NIR-QP/OD/PFD50)。


. 冷凍凝膠的體內(nèi)止血性能



圖5 a) 小鼠肝穿刺出血模型冷凍凝膠止血示意圖。b) 小鼠肝穿刺出血模型中的失血量(n=5)。c) 小鼠肝穿刺出血模型止血圖片。d) 大鼠肝十字切口出血模型冷凍凝膠止血示意圖。大鼠肝十字切口出血模型的止血時(shí)間(e)和失血量(f)(n=8)。g) 大鼠肝十字切口出血模型的止血圖片。h) 冷凍凝膠大鼠肝穿孔模型止血示意圖(n=8)。大鼠肝穿孔模型中的止血時(shí)間(i)和失血量(j)。k) 大鼠肝穿孔模型止血照片。


. 冷凍凝膠的血液濃縮效應(yīng)和血細(xì)胞/血小板活化效應(yīng)



圖6 a) 有和沒有血液的冷凍凝膠表面和橫截面的SEM圖像。b) SEM圖像顯示了血小板和血細(xì)胞在含有血液的冷凍凝膠表面上的聚集形態(tài)。


. 冷凍凝膠和血塊/冷凍凝膠復(fù)合敷料的皮膚傷口愈合



圖7 a) 第0、3、7和14天不同愈合過程的傷口愈合照片。b) 傷口的收縮率統(tǒng)計(jì)(n=5)。c) 愈合3、7和14天后再生組織切片上的H&E染色。Masson三色染色圖像(d)和第7天膠原蛋白相對(duì)面積覆蓋率的定量統(tǒng)計(jì)(e)(n=3)。


. 組織免疫熒光分析



圖8 a) 第3天用TNF-α和CD68標(biāo)記傷口切片,第7天用CD206和CD31標(biāo)記傷口切片的免疫熒光染色圖片。TNF-α(b)、CD68(c)、CD206(d)和CD31(e)相對(duì)面積覆蓋率的定量統(tǒng)計(jì)。數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示(n=3)。


  本研究開發(fā)了一種具有穩(wěn)定/動(dòng)態(tài)交聯(lián)混合網(wǎng)絡(luò)的導(dǎo)電冷凍凝膠敷料,具有網(wǎng)絡(luò)重塑特性和抗菌、抗氧化和組織密封性能。由于其對(duì)血液的富集和表面濃縮作用,吸收血液后易形成血塊/冷凍凝膠復(fù)合物,可以有效止血并進(jìn)一步促進(jìn)組織修復(fù)。由于動(dòng)態(tài)席夫堿的存在,QP/OD/PF冷凍凝膠敷料在吸水后的儲(chǔ)能模量隨時(shí)間降低,表現(xiàn)出網(wǎng)絡(luò)重塑特性。此外,冷凍凝膠還表現(xiàn)出適當(dāng)?shù)慕到庑阅堋⒖焖偃苊浤芰土己玫纳锵嗳菪浴CSP賦予冷凍凝膠電活性、優(yōu)異的抗氧化性能、光熱性能和抗菌活性。OD為冷凍凝膠提供了相對(duì)穩(wěn)定的席夫堿交聯(lián),PF-CHO的引入形成了更動(dòng)態(tài)的席夫堿交聯(lián),并賦予冷凍凝膠更好的血液濃縮和表面富集效果。掃描電鏡結(jié)果表明,冷凍凝膠對(duì)血液具有很強(qiáng)的濃縮和富集作用,可以激活血細(xì)胞和血小板的功能。使用一系列小鼠和大鼠肝出血模型證明了冷凍凝膠的良好止血效果,這歸因于冷凍凝膠的促凝血特性及其表面游離醛基提供的組織密封作用。基于冷凍凝膠與血液之間的相互作用,制備了一種生物活性血塊/冷凍凝膠復(fù)合敷料。通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn),包括傷口閉合率計(jì)算、膠原蛋白沉積分析、組織學(xué)檢查和免疫熒光染色,證實(shí)了這種復(fù)合敷料對(duì)全層皮膚缺損的傷口愈合效果優(yōu)于單獨(dú)使用冷凍凝膠。總之,血塊/冷凍凝膠復(fù)合敷料是一種新型有效的傷口修復(fù)止血敷料。


  感謝中國(guó)國(guó)家自然科學(xué)基金、中國(guó)國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃、陜西省重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃、中央高校基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)基金和中國(guó)博士后科學(xué)基金的共同支持。


  郭保林團(tuán)隊(duì)網(wǎng)站:https://gr.xjtu.edu.cn/en/web/baoling


  原文鏈接:https://advanced.onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/adfm.202419037

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